Хромогенный агар Оттавиани-Агости
Хромогенный агар на Listeria monocytogenes по Оттавиани-Агости (ALOA-агар) -
Chromocult Listeria Selective Agar, Base acc. Ottaviani and Agosti - ALOA-agar, Кат.№ 100427.0500, упаковка – 500 г
Селективная добавка - Listeria Selective Supplement, Кат.№ 100432.0010, упаковка - 10 флаконов
Обогатительная добавка - Listeria Selective Agar Enrichment Supplement, Кат.№ 100439.0010, упаковка – 10 флаконов
Питательная среда Мерк Миллипор (Merck Millipore)
 Listeria monocytogenes |
Chromocult Listeria Selective Agar (или ALOA-agar по Ottaviani, Agosti, Кат.N 100427, Кат.N 100420) – хромогенный селективный агар для выделения и подсчета Listeria monocytogenes из продуктов.
Среда соответствует рекомендациям ИСО 11290 (2004) и FDA/BAM (2003).
Среда соответствует ГОСТ 32031-2012 - Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes
Принцип действия
Богатая основа среды обеспечивает оптимальные условия для роста листерий. Включение в среду ингибиторов подавляет рост сопутствующих грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также дрожжей и грибов. Рост L.monocytogenes L.innocua не подавляется тогда, как рост других листерий задерживается (L.ivanovii) или полностью инибируется (L.seeligeri).
Все листерии обладают активностью фермента β-D-глюкозидазы и образуют при взаимодействии с хромогенным субстратом сине-зеленые колонии.
L.monocytogenes выявляется по наличию вирулентного фактора – фермента фосфатидилинозит-фосфолипазы С (PI-PLC). Фосфолипазная активность выявляется по наличию зоны просветления вокруг колоний L.monocytogenes. Кроме L.monocytogenes только L.ivanovii проявляет фосфолипазную активность.
Состав (г/л)
Пептон из мяса 18,0; пептон из казеина 6,0; дрожжевой экстракт 10,0; пируват натрия 2,0; глюкоза 2,0; глицерофосфат магния 1,0; сульфат натрия 0,5; хлорид натрия 5,0; хлорид лития 10,0; гидрофосфат натрия натрия 2,5; хромогенный субстрат - 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-β-D-глюкопиранозид 0,05; L-α-фосфатидил-инозит 2,0; налидиксовая кислота 0,02; цефтазидим 0,02; полимиксин 76700 IU; амфотерицин 0,01; агар-агар 13,0.
|
Приготовление 1. Растворить 35 г основы питательной среды Listeria Selective Agar Base (Кат.№ 100427.0500) в 476 мл дистиллированной воды, следующим образом. Вначале, растворить сухую среду в 300 мл дистиллированной воды при постоянном перемешивании. Затем добавить 176 мл, тщательно перемешать и нагревать на кипящей водяной бане до полного растворения при периодическом перемешивании среды в течение 20-35 мин. Не автоклавировать! Не перегревать! 2. После полного растворения среды охладить до 48-50°С на водяной бане. 3. В асептических условиях добавить 4 мл смеси стерильной дистиллированной воды с этанолом (соотношение 1:1) к флакону с селективной добавкой Listeria Selective Supplement. (Кат.№ 100432.0010). Добавить содержимое флакона (суспензия желтого цвета) селективной добавки к основе среды и тщательно перемешать. 4. Нагреть флакон с обогатительной добавкой Listeria Selective Agar Enrichment Supplement (Кат.№ 100439.0010) (20 мл) до 48-50оС и добавить к основе среды, аккуратно перемешивая. Внимание!!! Раствор антибиотиков термолабилен, т.е. чувствителен к нагреванию.Следует немедленно разлить чашки со средой после добавления селективной добавки с раствором антибиотиков к основе среды (16-18 мл на чашку Петри). рН среды 7,2±0,2 при 25°С. Готовая среда слегка мутная желтоватого цвета. Готовые чашки можно хранить 4 недели при 2-8оС в герметичных пакетах в холодильнике (защищены от высыхания и от света). Проведение анализа Нагреть чашки до комнатной температуры. При наличии конденсата чашки с агаром следует подсушить при 55оС 20 мин. Определение наличия/отсутствия L.monocytogenes Засеять поверхность хромогенной среды Chromocult Listeria Selective Agar петлей со среды Фразера. В соответствии с международным стандартом ИСО 11290-1 посев на поверхность хромогенной среды Chromocult Listeria Selective Agar проводится как после первого этапа селективного обогащения на среде Фразера ½ концентрации (30оС при 24ч), так и после второго этапа селективного обогащения на среде Фразера (37оС при 48ч). Для получения изолированных колоний поверхность хромогенного Chromocult Listeria Selective Agar засевается петлей. Количественный метод определения L.monocytogenes Приготовить серийные разведения образца (1:10) на забуференной пептонной воде. Засеять поверхность хромогенной среды Chromocult ListeriaSelective Agar 0,1 мл из соответствующих разведений образца. Инкубация Инкубировать 24 ч при 37оС. При отрицательном результате продлить инкубацию еще на 24ч. Все сине-зеленые колонии с зоной просветления среды вокруг колоний рассматриваются и учитываются предположительно как колонии Listeria monocytogenes. Результаты должны быть подтверждены. Подтверждение колоний можно проводить с использованием экспресс-теста Singlepath L.mono. |
Контроль качества
|
Тест-штаммы |
Рост |
Цвет колоний |
|
Listeria monocytogenes ATCC 13932 |
≥ 70% |
cине-зеленые с зоной просветления |
|
Listeria monocytogenes ATCC 19111 |
≥ 70% |
cине-зеленые с зоной просветления |
|
Listeria innocua ATCC 33090 |
≥ 70% |
cине-зеленые |
|
Escherichia coli ATCC 25922 |
≤ 0,001 % |
- |
|
Enterococcus faecalis ATCC 19433 |
≤ 0,001 % |
- |
|
Candida tropicalis ATCC 750 |
≤ 0,001 % |
- |