Питательная среда Мерк Миллипор (Merck Millipore)

Селективный агар для одновременного определения и подсчета колиформных бактерий и E.coli в питьевой воде и термически обработанных продуктах.

Хромогенный агар Chromocult Coliform Agar  (Мерк) для одновременного определения колиформных бактерий и E.coli в воде, продуктах, сырье, клиническом материале. Среда обеспечивает быстрый рост колиформных бактерий колоний (даже поврежденных клеток). Рост грамположительных бактерий в значительной степени ингибируется Тергитолом-7. Комбинация двух хромогенных субстратов позволяют одновременно определять колиформные бактерии и E.coli.

Характерный для колиформных бактерий фермент галактозидаза расщепляет хромогенный субстрат Salmon-GAL, что приводит к окрашиванию колоний в розовый (красный) цвет. Для идентификации E.coli используется хромогенный субстрат Х-глюкуронид, который расщепляется  под воздействием характерного для E.coli фермента β-глюкуронидазы. E.coli расщепляет оба хромогенных субстрата - как Salmon-GAL, так и X-глюкуронид, что приводит к окрашиванию колоний в темно-синий (фиолетовый) цвет. E.coli четко отличается от других колиформных бактерий, колонии которых окрашены в розовый цвет. Для подтверждения E.coli возможно проведение индольного теста непосредственно на чашке, поскольку среда включает триптофан.

Инструкция

Хромогенный агар  для определения колиформ и E.coli – Chromocult^®Coliform Agar for microbiology, Кат.№ 110426.0500, Упаковка – 500 г 

Идентификация колиформных бактерий
Фермент ß-галактозидаза колиформных бактерий расщепляет хромогенный субстрат Salmon-GAL, колонии окрашиваются в розовый (красный) цвет.

Идентификация E.coli
Фермент ß-глюкуронидаза E.coli расщепляет хромогенный субстрат X-глюкуронид. Так как E.coli расщепляет оба хромогенных субстрата, то колонии E.coli окрашиваются в темно-синий (фиолетовый) цвет и легко отличаются от других колиформных бактерий розового цвета.

Поскольку среда содержит триптофан, то можно поставить подтверждающий тест для E.coli на образование индола с реактивом Ковача.

Метод мембранной фильтрации
Одновременное определение колиформных бактерий и E.coli на хромогенном агаре Chromocult^® Coliform Agar основано на специфическом окрашивании колоний.

Принцип действия
Наличие в среде пептонов, пирувата, сорбитола и фосфатного буфера обеспечивает быстрый рост колоний, даже поврежденных клеток колиформных бактерий. Рост грамположительных бактерий в значительной степени ингибируется наличием Tergitol 7, который не оказывает негативного эффекта на рост колиформных бактерий. Кроме того, компания Merck разработала новую комбинацию двух хромогенных субстратов, которые позволяют одновременно определять общие колиформные бактерии и E.coli. 

Состав среды, (г/л):
Пептоны 3,0; хлорид натрия 5,0; дигидрофосфат натрия 2,2; гидрофосфат натрия 2,7; пируват натрия 1,0; триптофан 1,0; агар 10; сорбитол 1,0; Tergitol-7 0,15; хромогенная смесь 0,4.

Приготовление:
Растворить 26,5 г в 1 литре дистиллированной воды, нагревая на кипящей водяной бане. Перемешивать содержимое для полного растворения (примерно 35 мин). Среда может быть немного мутной. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ!  НЕ ПЕРЕГРЕВАТЬ!

рН: 6,8±0,2 при 25^оС

Примечание: Если анализируются образцы с большим количеством Pseudomonas и Aeromonas или грам-положительной микрофлоры, то необходимо добавить селективную добавку E.coli/Coliform Supplement (Кат.№1.00898.0001). Дать среде остыть до 45-50^оС и добавить 1 флакон селективной добавки для определения E.coli и колиформ – E.coli/Colirorm Selective-Supplement (Кат.№1.00898.0001).

Готовые чашки со средой опалесцируют и желтоватого цвета. Хранить чашки со средой в холодильнике, в темноте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки. Срок годности готовой среды на чашках – 6 месяцев.

Ход исследования:
Фильтровать образец воды, фильтр поместить на поверхность Chromocult Coliform Agar. Инкубировать 24 часа при 35-37^оС.

При посеве продукта высевается количество 0,1-0.2 мл из соответствующего разведения на поверхность хромогенной агаризованной среды. Образцы объема 1 мл высеваются глубинным посевом – к 1 мл образца добавляется 15 мл хромогенной среды 45-50^оС и перемешивается.

Учет результатов:

E.coli: темно-синие (до фиолетового) цвета колонии (реакция с Salmon-GAL и X-глюкуронидом)

Общие колиформные бактерии (ОКБ):  розового (до красного) цвета колонии (реакция с Salmon-GAL) и темно-синие (до фиолетового) цвета колонии (E.coli).

Другие грамотрицательные бактерии: бесцветные, за исключением некоторых организмов, которые обладают ß-глюкуронидазной активностью. Эти колонии светло-голубого (до бирюзового) цвета.

Для подтверждения E.coli нанести каплю реактива Ковача на колонии темно-синего (до фиолетового) цвета. Если происходит изменение цвета реагента до розово-красного в течение нескольких секунд, то тест на образование индола считается положительным.