ТЕСТ ЛАТЕКСНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ ДЛЯ ПОДТВЕРЖДЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ ЛЕГИОНЕЛЛ МИКРОГЕН LEGIONELLA (M45)

Набор реагентов для подтверждающей идентификации чистой культуры легионелл. Тест позволяет идентифицировать L.pneumophila (серогруппа 1, серогруппы 2-15) и другие виды легионелл (10 основных видов).

Тестовый реагент 1 представляет собой суспензию полистироловых латексных частиц, покрытых поликлональными кроличьими антителами против L.pneumophila серогруппа 1, тестовый реагент 2-15- антителами против L.pneumophila серогруппы 2-15. Тестовый реагент Legionella Species (Виды) позволяет подтвердить присутствие 10 наиболее важных видов легионелл, см. таблицу:

При смешивании частиц латекса с суспензией, содержащей соответствующие бактерии легионелл или инактивированные тепловым воздействием антигены легионелл, происходит иммунохимическая реакция агглютинации латекса- образование комочков, склеивание, которое наблюдается невооруженным глазом. Реакция наблюдается в течение 2 мин. Частицы латекса крупные, вследствие чего агглютинация хорошо различима на черном тестовом поле. Положительный контроль содержит инактивированные антигены Legionella, которые дают реакцию с Тестовым реагентом 1, Тестовым реагентом 2-15 и Тестовым реагентом Species.

Состав набора:

1.Тестовый реагент 1  М45а (флакон стеклянный 2,5 мл, голубая крышка)- 1 штука (на 50 тестов)

2. Тестовый реагент 2-15 М45b (флакон стеклянный 2,5 мл, желтая крышка)- 1 штука (на 50 тестов)

3.Положительный контроль M45с (флакон стеклянный 1 мл, черная крышка)- 1 штука (на 50 тестов)- для Тестовых реагентов 1, 2-15 и Species.

4. Тестовый реагент Species М45d (флакон стеклянный 2,5 мл, красная крышка)- 1 штука (на 50 тестов)

5.Изотонический солевой раствор 0,85% NaCl М40 (флакон пластиковый 5 мл, белая крышка)- 2 штуки

6.Реакционные слайды

6.Палочки пластмассовые для перемешивания 7.Инструкция по использованию

Условия хранения:

Все реагенты набора необходимо хранить при температуре 2-8°С. Не используйте реагенты после даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Примечания

1.Все реагенты необходимо довести до комнатной температуры перед использованием. 2.Не разводите какие-либо реагенты.

3.Не смешивайте реагенты набора.

4.Не допускайте замораживания реагентов набора.

5.Убедитесь перед использованием, что реакционный слайд чистый и сухой.

6.Считайте     положительным     результатом      только     агглютинацию-                          образование           комочков. Образование творожистой массы или волокон нельзя считать положительным результатом.

7.Не касайтесь капельницей реагентов положительного контроля и бактериальных образцов (во избежание контаминации).

Контроль качества

Контроль должен проводиться каждый раз при использовании набора.

1.Контроль реагентов. Осторожно встряхните флаконы с тестовыми реагентами (М45а, М45b, M45d) для перемешивания. Добавьте по 1 капле каждого реагента на 3 разные поля слайда. Добавьте по 1 капле солевого раствора (М40) в каждое поле слайда (с реагентами). Используя разные палочки (в комплекте) для каждого поля, перемешайте тщательно суспензии в полях. Покачайте слайд в течение 2 мин. Если наблюдается агглютинация, значит тестовые реагенты или солевой раствор контаминированы и не могут использоваться.

2. Положительный контроль. Добавьте 1 каплю положительного контроля М45с в одно из полей слайда. Добавьте в то же поле 1 каплю Тестового реагента 1 (М45а). Не касайтесь пипеткой флакона латексного реагента капли положительного контроля на слайде! (во избежание контаминации). Покачайте слайд. В течение 2 мин. должна наблюдаться агглютинация. Если агглютинации не наблюдается, используйте новый набор.

Повторите ту же процедуру с Тестовым реагентом 2-15 (М45b) и Тестовым реагентом Species (М45d). Так же должна наблюдаться агглютинация. Если агглютинации не наблюдается, используйте новый набор.

Примечание: сила реакции с положительным контролем может быть не одинакова для тестовых реагентов 1, 2-15 и Species.

Процедура теста

1. Добавьте по 1 капле солевого раствора М40 на 3 поля слайда.
2. Используя бактериологическую петлю, отберите 3-4 колонии тестируемой культуры с поверхности агара и приготовьте толстый однородный мазок рядом с каждой каплей солевого раствора (используйте для теста только колонии, имеющие морфологию, характерную для Legionella).
3. Смешайте мазки с солевым раствором, чтобы получилась однородная густая суспензия. Распределите суспензию по всей поверхности поля.
4. Если суспензия остается однородной, приступите к шагу 7. Если наблюдается образование волокон или гранул, произведите следующие процедуры:

5. Добавьте 0,5 мл изотонического солевого раствора в стеклянную пробирку. Отберите одну или несколько колоний с поверхности агара и приготовьте в пробирке мутную суспензию.
6. Кипятите суспензию в течение 5 минут. Дайте остыть до комнатной температуры. Добавьте по 30 мкл прокипяченной суспензии в каждое из трех чистых полей слайда.
7. Осторожно встряхните флаконы с тестовыми реагентами (М45а, М45b, M45d) для обеспечения однородности жидкости.
8. Добавьте 1 каплю Тестового реагента 1 (М45а) в первое поле слайда (с каплей суспензии), 1 каплю Тестового реагента 2-15 (М45b) во второе поле и 1 каплю Тестового реагента Species (М45d) в третье поле. Не касайтесь капельницами суспензий!
9. Смешайте каждый реагент с суспензией, используя для каждой комбинации новую палочку (в комплекте). Распределите полученную суспензию по всей поверхности поля.
10. Покачайте слайд в течение 2 мин.
11. Наблюдайте наличие или отсутствие процесса агглютинации в течение не более, чем 2 мин.

Интерпретация результата:

Учитывайте положительную реакцию (+) при наблюдении видимой агглютинации частиц латекса, образования комочков.

Учитывайте отрицательную реакцию (-) при отсутствии процесса агглютинации, суспензия без комочков.

< class="mce-object mce-object-undefined">*Неспецифическая агглютинация не означает отсутствие Legionella, но результат должен быть интерпретирован как неокончательный.

Ограничения в использовании теста

1.Образование волокон нельзя считать положительным результатом.

2. Старые и/или слизеподобные культуры могут не дать однородную суспензию в солевом растворе и могут дать атипичную агглютинацию. Такие культуры должны быть обработаны кипячением, как описано выше.

3.Колонии, давшие положительный результат с тестом латексной агглютинации, должны быть подтверждены как Legionella spp. по их неспособности расти на селективных питательных средах с отсутствием цистеина.