Инструкция по применению：

Предварительное размножение бактерий:
      1. Подготовка образца: асептическая операция, взвесьте 100 г (мл) образца, поместите его в стерильный пакет для гомогенизации, предварительно нагретый до 44 ℃ с 900 мл забуференной пептонной воды (BPW), и гомогенизируйте его с помощью гомогенизатора в течение 1-2 минут.Если образец жидкий, встряхните и хорошо перемешайте. При необходимости доведите рН гомогенного раствора образца до 6,8±0,2 с помощью стерильного раствора NaOH 1 моль/л или 1 моль/л HCl. Культивируйте при температуре 36 ℃±1 ℃ в течение 18 ч ±2 ч.
      Увеличение количества бактерий: Осторожно встряхните смесь для культивирования образцов, возьмите 1-10 мл бульона mLST-Vm и культивируйте при температуре 44 ℃ ± 0,5 ℃ в течение 24 ч ± 2 ч.

2. Вакцинация：
Поместите тест-пластину Enterobacterium cronosaki на плоский стол, снимите верхнюю оболочку, наберите 1 мл стерильной воды или стерильного физиологического раствора по каплям с помощью стерильной пипетки  добавьте в центр тестируемого образца, медленно покрывая верхнюю оболочку, чтобы избежать образования пузырьков.Дайте постоять 0,5 ~ 1 час, чтобы раствор для образца рассеялся и вновь образовался гель.Снимите крышку с верхней мембраны, соскребите 1 кольцо бактериостатического раствора с помощью 1 мкЛ инокуляционного кольца и выровняйте гель до отделения.
Или с помощью стерильной пипетки объемом 1 мл  наберите 1 мл бактериостатического раствора, введите его в пробирку, содержащую 9 мл стерильного физиологического раствора или фосфатного буферного разбавителя, и встряхните до получения гомогенного раствора для образца в соотношении 1:10 и т.д.
Приготовьте гомогенный раствор для образца, разбавленный 10 раз, каждый раз меняйте пипетку.В соответствии с оценкой состояния загрязнения образца для тестирования выбирают 2-3 разведения (это может быть сырая жидкость после добавления бактерий).Поместите тестируемый образец на плоский стол для экспериментов, снимите верхнюю пленку, наберите 1 мл образца стерильной соломинкой, добавьте капельки в центр тестируемого образца и медленно накройте верхнюю пленку, чтобы избежать образования пузырьков воздуха.Дайте постоять 3-5 минут, чтобы раствор для образца рассеялся и вновь образовал гель.

3. Культивирование: Поместите переднюю часть образца для теста горизонтально при температуре 44 ℃ ± 0,5 ℃ и культивируйте в течение 18 ~ 24 часов.

4. Интерпретация: Если область культивирования сине-зеленая, возможно, концентрация бактерий слишком высока. Образец необходимо дополнительно разбавить, чтобы получить точное количество.Если вам нужно отделить колонии для дальнейшего анализа, снимите крышку с верхней мембраны и с помощью инокуляционной иглы извлеките колонии для использования.

После культивирования в соответствии со стандартными требованиями или рекомендуемыми условиями культивирования в руководстве подсчитайте все сине-зеленые колонии невооруженным глазом или с помощью увеличительного стекла.Количество колоний более уместно в пределах 30-150CFU.Сине-зеленые колонии предположительно относятся к Enterobacterium Sakazaki, а другие серые колонии - к разным бактериям.Для дальнейшего подтверждения выберите подозрительные колонии для биохимической идентификации.