Грамотрицательная и оксидазо-отрицательная идентификация энтеробактерий

EnteroSystem 24R представляет собой 24-луночную систему, содержащую обезвоженные биохимические субстраты, для идентификации грамотрицательных бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Он работает очень просто: панель должна быть инокулирована суспензией анализируемого микроорганизма, взятой из чистой колонии, и затем инкубирована в печи. Через 24 часа оценивается изменение цвета в разных лунках. Результирующий паттерн положительных и отрицательных реакций преобразуется в числовой код, который будет последовательно использоваться для идентификации.

Результаты за три простых шага

1. Проводится 24 различных теста, по одному на каждую лунку, присутствующую в системе. Бактериальная суспензия, используемая для инокуляции лунок, служит для восстановления обезвоженной среды, присутствующей внутри.

1. Рост бактерий в лунках во время инкубации влечет за собой изменение цвета (положительная реакция), которое будет интерпретировано с использованием соответствующей таблицы.

1. Определяется числовой код микроорганизма, и окончательная идентификация получается с помощью программного обеспечения для кодирования Liofilchem (вы можете запросить его бесплатно). Нет необходимости устанавливать специальное программное обеспечение на компьютер, при желании вы можете работать в формате iCloud или даже использовать его со своего смартфона. Нажмите на изображение ниже, чтобы получить доступ к диску ldentification Code Disk от Liofilchem:

Таблица 24 тесты, проводимые с помощью EnteroSystem 24R

Первые 18 тестов такие же и с той же нумерацией, что и в системе EnteroSystem 18R (для тех, кто уже знаком с ее использованием). Остальные шесть тестов, от лунки 19 до лунки 24, показаны в конце таблицы:

Сбор образцов

Энтеросистема 24R показана для использования с любым клиническим образцом или любым другим типом. Идентифицируемый микроорганизм должен быть предварительно выделен в культуральной среде, способствующей росту энтеробактерий, такой как агар Макконки, эозинметиленовый голубой агар, агар сальмонеллы и шигеллы, гектоеновый энтеросолюбильный агар или неселективный кровяной агар (например. Триптих Соевый Агар с 5% овечьей кровью).

Подробное описание процедуры тестирования с помощью EnteroSystem 24R

Приготовление бактериальной суспензии

• Микроорганизм, подлежащий идентификации, должен быть недавно выделен (18-24 часа) из чистой колонии; колонии, полученные из культур более чем за 48 часов, могут дать неожиданные результаты.
• Перед посевом анализируемого микроорганизма необходимо провести окрашивание по Граму и тест на оксидазу. Используйте энтеросистему 24R только для грамотрицательных, оксидазо-отрицательных бактерий.
• Измельчите одну или несколько морфологически сходных колоний, хорошо изолированных от твердой культуральной среды, и суспендируйте их в физиологическом растворе, входящем в комплект (бактериальная суспензия 0, 5 Макфарланда). Полученную суспензию следует использовать для посева панели (инокуляции) сразу после ее приготовления.

Примечание: Каплю бактериальной суспензии можно использовать до или после инокуляции системы для посева в наклонную пробирку с агаром или чашку (любую подходящую среду) для контроля чистоты.

Инокуляция системы

1. Извлеките систему из упаковки и закалите.
2. Запишите данные, относящиеся к образцу, и дату начала анализа.
3. Добавьте диск с "Арабинозой" в лунку 17-ARA и диск с "Ксилозой" в лунку 23-XYL.
4. Перелейте по 0,2 мл бактериальной суспензии в каждую лунку на панели и залейте 2 каплями вазелинового масла лунки 2-LDC, 3-ODC, 4-ADC, 7-UR и 8-H2S, чтобы создать анаэробную среду.
5. Накройте панель крышкой и инкубируйте при 36 ± 1 ° C в течение 12-18-24 часов.

Интерпретация результатов

По завершении инкубационного периода:

1. Введите 2 капли альфа-нафтола и 1 каплю 40% NaOH в лунку 10-VP. Подождите 15-20 минут после добавления реагентов, прежде чем проводить считывание.
2. Введите 2 капли реагента Ковача в 11-дюймовую лунку. Подождите 1-2 минуты после добавления реагента, прежде чем проводить считывание.
3. Наблюдайте за изменением цвета лунок и интерпретируйте результаты, следуя таблице интерпретации.
4. Запишите результаты в таблицу результатов и составьте 8-значный числовой код, следуя инструкциям, приведенным в разделе ФОРМИРОВАНИЕ ЧИСЛОВОГО КОДА.
5. Идентифицировать микроорганизм с помощью программного обеспечения для идентификации.

Таблица толкования

Лунка	Тест	Положительная реакция	Отрицательная реакция
1-ONPG	Гидролиз ОНПГ	желтый	бесцветный
2-LDC	Декарбоксилирование лизина	красный	желто-оранжевый
3-ODC	Декарбоксилирование орнитина	красный	желто-оранжевый
4-АЦП	Декарбоксилирование аргинина	красный	желто-оранжевый
5-PD	Дезаминирование фенилаланина	черно-коричневый	желтый
6-ЦИТ	Использование цитрата	темно-сине-зеленый	светло-зеленый
7-UR	Гидролиз мочевины	красно-фуксия	желто-оранжевый
8-H 2 S	Производство сероводорода	черный	желтый
9-MLN	Использование малоната	сине-зеленый	желтый
10-ВП	Test VP	розово-красный	желтый
11-IND	Индольный тест	красный	желтый
12-GLU	Глюкоза	желтый	сине-зеленый
13-ЧЕЛОВЕК	Маннитол	желтый	сине-зеленый
14-ИНО	Инозитол	желтый	сине-зеленый
15-СОР	Сорбитол	желтый	сине-зеленый
16-САК	Сахароза	желтый	сине-зеленый
17-ARA	Арабиноза	желтый	сине-зеленый
18-RAF	Рафиноза	желтый	сине-зеленый
19-ОПЕРАТИВНАЯ память	Рамноза	желтый	сине-зеленый
20-МЕЛ	Мелоза	желтый	сине-зеленый
21-ЛАК	Лактоза	желтый	сине-зеленый
22-TRE	Трегалоза	желтый	сине-зеленый
23-XYL	Ксилоза	желтый	сине-зеленый
24-DUL	Dulcitol	желтый	сине-зеленый

 

Формирование числового кода

Биохимические тесты разделены на 8 групп по 3 теста, каждой из которых будет присвоено значение 1, 2 или 4:

• Valor 1 : primer test positivo de cada grupo (ONPG, ADC, UR, VP, MAN, SAC, RAM, TRE);
• Valor 2 : segundo test positivo de cada grupo (LDC, PD, H2S, IND, INO, ARA, MEL, XYL);
• Valor 4 : tercer test positivo de cada grupo (ODC, CIT, MLN, GLU, SOR, RAF, LAC, DUL);
• Значение 0 : отрицательные реакции от каждой группы.

8-значный код получается путем суммирования значений, полученных в каждой группе. Приведенный ниже пример показывает нам, как составляется числовой код:

 

Другие соображения по поводу энтеросистемы 24R

Контроль качества

Каждая партия EnteroSystem 24R проходит контроль качества с использованием следующих эталонных микроорганизмов: Escherichia coli ATCC®, Salmonella Typhimurium, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae и Enterobacter cloacae.

Меры предосторожности при использовании и хранении

Энтеросистема 24R не классифицируется как опасная в соответствии с действующим законодательством. Для его использования рекомендуется ознакомиться с паспортом безопасности. Это одноразовое устройство, предназначенное исключительно для диагностики in vitro, профессионального, лабораторного использования и использования должным образом обученными пользователями, с утвержденными методами асептики и защиты от патогенных микроорганизмов.

Рекомендуется хранить EnteroSystem 24R при температуре 2-8 ° C в оригинальной упаковке, вдали от источников тепла и избегать чрезмерных перепадов температур. При соблюдении этих условий продукт будет действителен до даты истечения срока годности, указанной на этикетке. Не следует использовать после этой даты. Его следует удалить, если наблюдаются признаки порчи.

Утилизация отходов

После использования EnteroSystem 24R и материал, вступивший в контакт с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими в лаборатории правилами обеззараживания и утилизации потенциально загрязненных материалов.

Work-flow

Содержимое упаковки EnteroSystem 24R (ссылка 2360071619)

• 20 Панелей EnteroSystem 24R
• 20 Viales de Physiological Solution (7.0 mL)
• 1 Картридж с ксилозным диском (20 дисков)
• 1 Картридж с арабинозным диском (20 дисков)
• Лист инструкций и блокнот с записями результатов